|
При анализе воды надо контролировать не только содержание токсичных химических веществ, но и количество микроорганизмов, характеризующих бактериологическое загрязнение питьевой воды ОМЧ-общее микробное число.В воде централизованного водоснабжения это число не должно превышать 50 КОЕ/мл, а в колодцах, скважинах - не более 100 КОЕ/мл
Санитарно-микробиологическос исследование воды проводится в плановом
порядке с целью текущего надзора, а также по специальным эпидемиологичес-
ким показаниям. Основными объектами такого исследования являются:
Питьевая вода центрального водоснабжения (водопроводная вода);
Питьевая вода нецентрализованного водоснабжения;
Вода поверхностных и подземных водоисточников;
Сточные воды;
Вода прибрежных зон морей;
Вода плавательных бассейнов.
Основными показателями оценки микробиологического состояния питьевой воды согласно действующим нормативным документам являются:
1. Общее микробное число (ОМЧ) - количество мезофильных бактерий в 1 мл волы.
Коли титр
- наименьший объем воды (в мл), в котором обнаружена хотя бы одна живая
микробная клетка, относящаяся к БГКП.
Индекс БГКП
- количество БГКП в 1 л воды.
3. Количество спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.
4. Число колифагов в 100 мл воды.
Определение ОМЧ позволяет оценить уровень микробиологического загрязнения питьевой воды. Этот показатель является незаменимым для срочного обнаружения массивного микробного загрязнения.
Общее микробное число - это число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать на питательном агаре при гемперазуре 37 °С и течение 24 ч колонии, видимые при двукратном увеличении.
При определении общего микробного числа 1мл исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри и заливают 10-12 мл теплого (44 °С) расплавленного питательного агара. Среду аккуратно перемешивают с водой, равномерно и
без пузырьков воздуха распределяя по дну чашки, после чего закрывают крышкой и оставляют до застывания. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24 часов. Подсчитывают общее количество колоний, выросших в обеих чашках, и определяют среднее значение. Окончательный результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой воды. В 1 мл питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ
Определение БГКП
При этом определяют общие колиформные бактерии - ОКБ и термотолерантные колиформные бактерии - ТКБ.
ОКБ – грамамотрицатсльные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 48 часов. ТКБ входят в число ОКБ, облажают их признаками, но ферментирую при 44°С.Для определения энтеробактерий – метод мебранных фильтров или титрационный.
Микробное число - основными критериями оценки микробиологического состояния питьевой воды, исходя из действующих нормативных документов, является ОМЧ (общее микробное число), которое характеризует количество аэробных и анаэробных бактерий в одном миллилитре воды, образующихся за сутки при температуре 37 градусов, в питательной среде. Данный показатель является фактически незаменимым для быстрого обнаружения массового микробного загрязнения.
Для определения общего микробного числа один миллилитр исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают 10-15 мл тёплого (около 44 °С) питательного агара в расплавленном виде. Среду аккуратно смешивают с водой, равномерно и без воздушных пузырьков воздуха распределяют по дну чашки, после этого закрывают крышкой и оставляют в чашке Петри до застывания. Тоже самое проделывают в другой чашке. Посев в термостате инкубируют при температуре 37 °С в течение суток. Затем при двукратном увеличении под микроскопом подсчитывают общее количество колоний, выросших в двух чашках, и определяют среднее значение. В 1 мл питьевой воды не должно быть более 50 КОЕ.
Таблица 6 – Число колоний на МПА при температуре 37°С
Для расчета концентрации ОМЧ при температуре 37°С используется формула 1.
X (ОМЧ, 37°С) = = 110,81 КОЕ/мл
Рисунок 18 – Цельная проба Рисунок 19 – Концентрация 10 -1
Рисунок 20 – Концентрация 10 -2
При температуре 37°С на чашках выросли колонии трех типов:
1 тип: крупные колонии, есть точечные и мелкие; форма колоний
– круглая; профиль колоний – выпуклый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний
– непрозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.
2 тип: колонии средние; форма колоний – круглая; профиль колоний – выпуклый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – мутные; цвет колоний
– оранжевые. Окраска по Граму выявила грамположительные длинные палочки.
3 тип: форма колоний – круглая; профиль колоний – врастающий в субстрат; структура колоний – однородная; прозрачность колоний – прозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамположительные короткие палочки.
Рисунок 21 – препарат 1 типа
Рисунок 23 – препарат 3 типа колоний
Таблица 7 – Число колоний на МПА при температуре 22°С
Для расчета концентрации ОМЧ при температуре 22°С используется формула 1.
X (ОМЧ, 22°С) = = 130,63 КОЕ/мл
где Y – соотношение ОМЧ при температуре 22°С и ОМЧ при температуре 37°С, [КОЕ/мл]
Y = КОЕ/мл
Рисунок 24 – Цельная проба Рисунок 25 – Концентрация 10 -1
Рисунок 26 – Концентрация 10 -2
При температуре 22°С на чашках выросли колонии трех типов:
1 тип: крупные колонии, есть точечные; форма колоний
– неправильная; профиль колоний – изогнутый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – мутные; цвет колоний – кремовый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.
2 тип: крупные колонии; форма колоний – круглая; профиль колоний – плоский; край колоний – неправильный; структура колоний – неоднородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, шероховатая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.
3 тип: крупные колонии; форма колоний – круглая; профиль колоний – изогнутый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.
Рисунок 27 – препарат 1 типа
Рисунок 29 – препарат 3 типа колоний
Таблица 8 – Сравнительная характеристика полученных показателей с требованиями к составу и свойствам воды водных объектов рекреационного водопользования
| № | Показатели | Полученные данные | Норма для рекреационного водопользования |
| Плавающие примеси | Отсутствуют | На поверхности воды не должны обнаруживаться пленки нефтепродуктов, масел, жиров и скопление других примесей | |
| Запахи | Интенсивность слабая (2 балла) | Вода не должна приобретать запахи интенсивностью более 2 баллов, обнаруживаемые непосредственно | |
| Водородный показатель (рН) | 8,2 ед. рН | Не должен выходить за пределы (6,5-8,5) ед. рН | |
| Общие колиформные бактерии (ОКБ) | 3200 КОЕ/100мл | Не более 500 КОЕ/100 мл | |
| Общее микробное число (ОМЧ) при 22°С | 130,63 КОЕ/мл. | Не нормируется | |
| Общее микробное число (ОМЧ) при 37°С | 110,81 КОЕ/мл | ||
| Соотношение ОМЧ (22°С):ОМЧ (37°С) | 1,2 КОЕ/мл | Более 4 КОЕ/мл |
Выводы:
I. Изучили физико-химические показатели пробы воды из пруда в Боровиках города Кирова:
1. Характер запаха пробы воды землистый. При температуре 22°С интенсивность запаха слабая, а при 60°С – заметная. Интенсивность запаха соответствует норме.
2. Показатель pH пробы воды составил 8,2 ед. pH, следовательно, среда слабощелочная, соответствует норме.
3. Плавающих примесей в пробе воды не обнаружено.
II. Определили микробиологические показатели исследуемой пробы воды:
1. Концентрация общих колиформных бактерий (ОКБ) составила 32 КОЕ/мл. Что превышает норму для рекреационного водопользования в 6,5 раз.
2. При определении термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) при температуре 37°С колонии выросли из всех разведений, окраска мазков по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки во всех разведениях. При температуре 44°С колонии выросли только из разведения с концентрацией 10 -3 , окраска мазков по Граму выявила грамотрицательные длинные палочки.
3. Оксидазный тест положительный у культуры с концентрацией 0,09, выросшей при температуре 37°С. У остальных культур оксидазный тест отрицательный.
4. При 37°С на чашках с МПА выросло 3 типа колоний. Окраска по Граму выявила грамотрицательные и грамположительные палочки.
5. Общее микробное число (ОМЧ) при 37°С составило 110,81 КОЕ/мл.
6. При 22°С на чашках с МПА выросло 3 типа колоний. Окраска по Граму выявила грамотрицательные палочки.
7. Общее микробное число (ОМЧ) при 22°С составило 130,63 КОЕ/мл.
8. Соотношение ОМЧ при температуре 22°С к ОМЧ при температуре 37°С составило 1,2 КОЕ/мл. Следовательно, водоем не способен к самоочищению.
Общее микробное число – это количество бактерий, имеющихся в определенном объеме исследуемого материала. Этот показатель служит лишь для приближенных относительных оценок. Методы определения ОМЧ можно разделить на 2 группы:
прямой подсчет бактерий в счетных камерах, под обычным или фазово-контрастным микроскопом,
количественный посев на плотные питательные среды. Менее точный, так как выявляет только группы микроорганизмов, растущих при заданном режиме.
Санитарно-показательные микроорганизмы (спм)
Санитарно-показательными являются микроорганизмы, указывающие на загрязнения внешней среды выделениями человека или животных. Обычно это комменсалы естественных полостей. При выявлении СПМ производится их количественное определение, результаты исследований выражаются в двух величинах: индекс СПМ (это количество СПМ, обнаруженное в определенном объеме или количестве исследуемого объекта, для определения которого используют метод мембранных фильтров и метод бродильных проб) ититр СПМ (это наименьший объем исследуемого материала, в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ) – величина, обратная индексу. Например:
coli-titr = -------- (см. таблицу)
Основные характеристики СПМ.
СПМ должны постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделятся в окружающую среду.
СПМ не должны размножаться во внешней среде.
Устойчивость СПМ во внешней среде должна быть несколько больше, чем у патогенных организмов.
У СПМ не должно быть во внешней среде двойников, с которыми их можно перепутать.
СПМ не должны изменяться во внешней среде.
Методы идентификации и дифференциации СПМ должны быть простыми.
СПМ воды – кишечная палочка, воздуха – зеленящий стрептококк, почвы – клостридиум перфрингенс, молока – кишечная палочка.
СПМ делят на 3 группы:
Группа А включает обитателей кишечника человека и животных, их расцениваются как индикаторы фекального загрязнения (эшерихии, энтерококки, протеи, сальмонеллы, сульфитвосстанавливающие клостридии, термофилы, бактериофаги, бактероиды, синегнойная палочка, кандиды).
Группа В включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки, их расценивают как индикаторы орального загрязнения (стрептококки, стафилококки).
Группа С включает сапрофитные микроорганизмы, обитающие во внешней среде, их расценивают как индикаторы процессов самоочищения (бактерии-протеолиты, бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, грибы, актинимицеты, синезеленые водоросли).
Патогенные микроорганизмы (пм)
Обнаружение ПМ во внешней среде производится:
Путем прямого посева на питательные среды.
Путем посева после предварительной концентрации микроорганизмов с помощью фильтрации, центрифугирования, осаждения коагулянтами и т.д.
Идентификация ПМ производится согласно общепринятым схемам.
Согласно ГОСТу “патогенные микроорганизмы и их токсины должны отсутствовать в питьевой воде и пищевых продуктах”.
Домашнее задание к занятию №1
Клиническое проявление инфекций, вызванных клебсиеллами и протеем. Патогенетические особенности.
Классификация клебсиелл и протеев
Морфологические, культуральные, биохимические особенности клебсиелл и протеев.
Методы лабораторной диагностики.
Специфическая профилактика и лечение инфекций, вызванных клебсиеллами и протеем.
Предмет санитарной микробиологии.
Задачи санитарной микробиологии.
Принципы и методы санитарно-микробиологических исследований.
Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах и общем микробном числе.
Требования, предъявляемые к санитарно-показательным микроорганизмам.
Классификация санитарно-показательных микроорганизмов.
Сырое молоко - молоко, не подвергавшееся термической обработке при температуре более чем 40ºС или обработке, в результате которой изменяются его составные части.
Сырое молоко может содержать опасные микроорганизмы, которые могут вызывать инфекционные болезни и пищевые отравления. Сырое молоко занимает первое место среди продуктов, употребление которых связано с риском получить серьезное заболевание.
Сорт молока зависит от количеств МАФАнМ в 1 мл молока, по санитарным правилам и нормам (СанПиН 2.3.2.1078-01) сырое молоко подразделяют на:
- на молоко сырое, высший сорт - не более 300 тыс. бактерий в 1 мл;
- на молоко сырое, I сорт - не более 500 тыс. бактерий в 1 мл;
- на молоко сырое, II сорт - не более 4 млн бактерий в 1 мл.
Цель исследования: изучить уровень микроорганизмов в сыром молоке. В связи с этим, была поставлена задача: определить уровень общего микробного числа в молоке, а именно КМАФАнМ (количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов).
Материалом для исследования служило сырое молоко, взятое от коровы по кличке «Снежинка», симментальской породы находящейся в стационаре БашГАУ.
Рисунок 1 . Образец исследуемого молока.
Определение КМАФАнМ проводила согласно действующего ГОСТ Р 53430-2009. Метод основан на способности мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов размножаться на питательной среде (МПА) при температуре 30±1°С в течение 72 ч.
Из сырого молока готовила последовательные десятикратные разведения, т.е. 1 мл сырого молока вносила в пробирку с 9 мл стерильной воды для получения первого разведения 1:10 (10‾¹). Из первого разведения 1 мл перенесла во вторую пробирку с 9 мл стерильной воды – получилось второе разведение 1:100 (10‾²) и так далее до разведения 10 -5 .
Выделение КМАФАнМ из проб сырого молока проводила путем посева трех последних разведений (10 -3 , 10 -4 , 10 -5) (таблица 1).
Таблица 1 .
Схема посевов на питательные среды
|
Питательная среда |
Выделяемые микроорганизмы |
Разведения |
||||
По 1 мл каждого разведения внесла в одну чашку Петри, с заранее маркированной крышкой, и залила 14±1 мл расплавленным и охлажденным до температуры 40-45°С агаром. Сразу после заливки агара содержимое чашки Петри тщательно перемешала путем легкого вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала. После застывания агара чашки Петри перевернула крышками вниз и поместила в термостат при 30±1°С на 72 часа.
Количество выросших колоний подсчитала в каждой чашке, умножила на степень (формула 1).
Формула расчета: Х= n*10 m
где n - количество колоний, подсчитанных на чашке Петри;
m - число десятикратных разведений.
Получила следующее среднее значение (таблица 2).
Таблица 2.
Количество выросших колоний
Из таблицы 2 видно, что в чашке Петри с разведением 10‾ 3 выросло 21 колония, что соответствует 21000 микроорганизмов; в чашке с разведением 10‾ 4 – 13 колоний (130000), а в чашке с разведением 10‾ 5 – 6 колонии (600000). Среднее значение трех показателей составило 250333 (250,333 тыс.) микроорганизмов.
Таким образом, общее микробное число в молоке, а именно количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в исследуемом молоке составляет 250,333 тыс. По санитарным правилам и нормам (СанПин 2.3.2.1078-01) данное сырое молоко можно отнести к категории «высший сорт», поскольку КМАФАнМ составило менее 300 тыс. бактерий в 1 мл.
Также необходимо отметить, что данное сырое молоко соответствует ГОСТ Р 53430-2009, пригодно для непосредственного потребления, переработки на молочные продукты, отвечает требованиям санитарного состояния содержания животных и гигиены получения молока.
Список литературы :
- Госманов Р.Г. Санитарная микробиология: Учебное пособие. – СПб.: Издательство «Лань», 2010. – 240с.
- Ильясова З. З. Методические указания к практическим занятиям С2.Б.11 Ветеринарная микробиология и микология: Методические указания / З. З. Ильясова. – Уфа: Башкирский ГАУ, 2015. – 28 с.
- Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа: ГОСТ Р 53430-2009. – Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 ноября 2009 г. № 520-ст. – М. : Стандартинформ, 2010.
Количественный показатель, отражающий содержание мезофильных аэробных организмов в одном миллилитре жидкости, принято называть общим микробным числом воды. Поскольку бактериологический анализ жидкости – процесс трудоемкий, для определения уровня ее загрязнения используют показатель суммарного количества микробов, образующих колонии. Этот тест помогает выявить бактерии в среде, свидетельствует об уровне ее загрязненности.
лаборатория нашей компании при МГУ имени М.В. Ломоносова
Цены на бактериологический анализ
От 2 500 руб. ЗАКАЗАТЬ
Микробиологический анализ (2 показателя)
Исследуемые показатели: общее микробное число (ОМЧ), общие колиформные бактерии и термотолерантные колиформные бактерии.
Исследование воды на наличие бактерий
Для подсчета общего микробного числа питьевой воды применяется мембранный метод, включающий проведение нескольких этапов:
- воду пропускают через мембрану с порами размером в 0,45 мкм;
- на ее поверхности появляются все микроорганизмы;
- мембрана с бактериями помещается в специальную среду с температурой 30-37°С, где патогенные микроорганизмы проходят инкубационный период, размножаются и образуют колонии, которые легко подсчитать.
Такой анализ не позволяет однозначно судить о наличии болезнетворных организмов, но свидетельствует о бактериологической загрязненности жидкости в целом. Для проведения исследования обращайтесь в компанию "ДОМИАТО". Мы гарантируем высокую скорость и качество лабораторных работ. Наши специалисты исследуют воду на наличие потенциально опасных организмов, подберут подходящую систему водоочистки и установят ее в кратчайшие сроки.
Узнайте общее микробное число питьевой воды, обратившись в компанию "ДОМИАТО", и получите возможность подобрать эффективные средства для очистки жидкости.
