Темновая фаза фотосинтеза
Американский ученый Мэлвин Кальвин для изучения темновых реакций фотосинтеза, связанных с фиксацией и превращением углекислого газа, широко использовал метод меченых атомов.
Вещества, имеющие радиоактивную метку, по химическим свойствам практически не отличаются от обычных. Однако наличие радиоактивного атома позволяет проследить за судьбой молекулы, ее превращениями в другие соединения, ведь излучение, испускаемое меткой в ходе распада, может быть легко измерено с помощью приборов.
Предположение М.Кальвина подтвердилось – углекислый газ действительно присоединяется к пятиуглеродному сахару под названием рибулезодифосфат (РДФ ). Это - реакция карбоксилирования , которая катализируется ферментом рибулезодифосфаткарбоксилазой . Этот фермент составляет половину всех растворимых белков хлоропластов и, вероятно, по массе превосходит все остальные белки на Земле. Его концентрация в хлоропластах, равная примерно 0,5 мМ, сравнима с концентрациями субстратов катализируемой им реакции.
Фосфоглицериновая кислота (ФГК) превращается затем в фосфоглицериновый альдегид (ФГА ) (рис. 10). На этом этапе и возникает потребность в продуктах световых реакций – АТФ и НАДФ ∙ Н. В темноте в хлоропластах не образуются эти богатые энергией соединения, и поэтому фосфоглицериновая кислота не превращается в трехуглеродное соединение - фосфоглицериновый альдегид, что ведет к остановке синтеза органических веществ. Этот этап цикла Кальвина называется восстановительным .
Ну а какова же дальнейшая судьба фосфоглицеринового альдегида? Из шести молекул этого соединения в результате циклических превращений возникают три молекулы рибулезодифосфата, необходимого для присоединения новых молекул углекислого газа. Цикл этих реакций получил название - этапрегенерации акцептора. Шестая молекула ФГА выходит из цикла Кальвина и, по мере накопления молекул фосфоглицеринового альдегида, из них возникают различные продукты: глюкоза в ягодах винограда, сахароза в корнях сахарной свеклы, крахмал в клубнях картофеля, инулин в корневищах цикория и многие другие.
Работы М. Кальвина по выяснению сущности темновых реакций фотосинтеза – крупнейшее достижение современной физиологии растений. В 1961 году он был удостоен Нобелевской премии.
Итак, М. Кальвин установил, что углекислый газ вовлекается в цепь реакций, носящих циклический характер: он присоединяется к рибулезодифосфату, а в конце превращений вновь образуется это же вещество, готовое к присоединению новых молекул углекислого газа. Совокупность темновых реакций фотосинтеза получило название цикла Кальвина.
Изучая зеленые растения, ученые убеждались в том, что во всех случаях путь фотосинтетических превращений одинаков. И только в 1966 году австралийские ученые Хетч и Слэк установили, что в некоторых растениях в частности кукурузе, эти превращения протекают по-иному, с отклонением от схемы Кальвина. У кукурузы углекислый газ присоединяется не к рибулезодифосфату, а к трехуглеродному соединению – фосфоенолпировиноградной кислоте , что приводит к образованию четырехуглеродного (С 4) соединения – щавелевоуксусной кислоты . После выдерживания растений в атмосфере с меченым углекислым газом это вещество первым выявляется на хроматограммах. По этой причине путь фотосинтетических превращений у кукурузы получил название С 4 -пути . А вот цикл превращений по Кальвину обозначили как С 3 -путь , поскольку на хроматограммах первым выявляется трехуглеродное соединение ФГК – фосфоглицериновая кислота.
Итак, СО 2 , диффундирующий в лист через устьица, попадает в цитоплазму клеток мезофилла листа, где при участии фермента фосфоенолпируваткарбоксилазы вступает в реакцию с фосфоенолпируватом (ФЕП), образуя щавелевоуксусную кислоту. Последняя поступает в хлоропласты, где восстанавливается до яблочной кислоты (малата ) за счет НАДФ ∙ Н, образующегося в световой фазе фотосинтеза (рис.11).
Образовавшись в клетках мезофилла листа, малат перемещается затем в особые клетки, окружающие сосуды. Это так называемые клетки обкладки сосудистых пучков (рис.12). В них так же есть хлоропласты, только они значительно крупнее находящихся в клетках мезофилла и часто не имеют гран. Здесь, в клетках обкладки малат отщепляет углекислый газ (декарбоксилируется ), который вовлекается в цикл фотосинтетических превращений уже по знакомой нам схеме Кальвина. Наряду с углекислым газом из малата образуется фосфоенолпируват , который, возвратившись в клетки мезофилла листа, вновь может присоединять молекулы углекислого газа.
Помимо кукурузы, С 4 -путь фотосинтеза обнаружен у некоторых других злаков, преимущественно тропических и субтропических растений (сахарный тростник, сорго, просо). В настоящее время известно 19 семейств цветковых растений в которых есть С 4 –виды.
Зачем же растениям потребовалось так усложнять процесс фотосинтеза? Ведь поскольку каждая молекула СО 2 должна связаться дважды, затраты энергии при С 4 -фотосинтезе примерно вдвое больше, чем при С 3 -фотосинтезе. Оказалось, что С 4 -путь имеет ряд преимуществ по сравнению с С 3 -путем. Во-первых, ФЭП-карбоксилаза более эффективно фиксирует СО 2 , чем РДФ-карбоксилаза и в клетках обкладки сосудистых пучков накапливается большое количество СО 2 . С одной стороны, это создает лучшие условия для работы РДФ-карбоксилазы, а с другой – подавляет фотодыхание .
Фотодыхание – это светозависимое поглощение кислорода и выделение СО 2 . Оно не имеет никакого отношения к обычному дыханию и происходит в результате того, что РДФ-карбоксилаза взаимодействует не только с СО 2 , но и с молекулярным кислородом. При этом образуется ненужный гликолат на дальнейшие превращения которого расходуется энергия и выделяется СО 2 , который уже однажды утилизировался в процессе фотосинтеза. Фотодыхание снижает потенциальную урожайность С 3 -растений на 30-40%. Поэтому главное преимущество С 4 -фотосинтеза состоит в том, что значительно возрастает эффективность фиксации СО 2 , а углерод не теряется бесполезно в результате фотодыхания. И хотя С 4 –растения потребляют больше энергии, такие растения обычно растут в условиях, где освещенность очень высока. Поэтому они более эффективно используют высокую интенсивность освещения и высокие температуры тропических районов. Во-вторых, С 4 -растения лучше переносят засуху. Чтобы уменьшить потерю воды путем транспирации, растения прикрывают устьица, а это ведет к уменьшению поступления СО 2 . Однако двуокись углерода у них фиксируется настолько быстро, что обеспечивает потребности фотосинтеза. А на каждую фиксированную молекулу СО 2 они расходуют в два раза меньше воды, чем С 3 -растения. Не удивительно поэтому, что к С 4 - растениям относятся многие виды засушливой тропической зоны. Едва взойдет солнце, как растения сразу же начинают использовать запасенный в органических кислотах углекислый газ для синтеза различных веществ. Потому-то они растут быстрее.
Путь С4 получил свое название, т.к. в темновой фазе первичным продуктом фиксации СО2 в этом случае является органическое соединение не с тремя, а с четырьмя атомами углерода (щавелевоуксусная кислота). Таким типом фотосинтеза обладают тропические растения жарких стран, например, бромелиевые. Было давно замечено, что эти растения усваивают СО2 намного лучше С3 растений. В анатомической структуре листьев С4-растений, наряду с нормальными обычными хлоропластами, вокруг сосудистых пучков у них имеются особый вид очень плотных хлоропластов почти без тилакоидов, но наполненных крахмалом. Эти хлоропласты назвали обкладочными.
В обычных хлоропластах у С4 растений, как и положено, протекает световая фаза фотосинтеза, а также происходит фиксация СО2 , но при этом образуется щавелевоуксусная кислота. Такая щавелевоуксусная кислота превращается в яблочную, которая поступает в обкладочные хлоропласты, где сразу расщепляется с выделением СО2. А дальше все идет, как и у нормальных С3 растений. При этом концентрация СО2 в обкладочных хлоропластах в результате становится значительно выше, чем у С3 растений, а очень плотное расположение этих хлоропластов обеспечивает то, что кислорода к ним почти не поступает, межклетников-то нет. Поэтому, раз нет кислорода, а углекислого газа сколько хочешь, фотодыхание не наступает.
Таким образом, у С4 растений и фиксация СО2 происходит более эффективно в виде других соединений, и образование сахаров осуществляется в особых хлоропластах, в результате чего сокращается интенсивность фотодыхания и связанных с ним потерь.
С4 растения могут захлопнуть свои устьица в жару, и не терять такой драгоценной влаги. У них обычно накоплено достаточно СО2 в виде яблочной кислоты.
27. Фотодыхание: биохимические реакции, их локализация. Физиологическая роль фотодыхания.
Фотодыхание – это активируемый светом процесс выделения СО2 и поглощения О2. Первичным продуктом фотодыхания является гликолевая кислота. Фотодыхание усиливается при низком содержании СО2 и высокой концентрации О2 в воздухе. В этих условиях рибулозодисфаткарбоксилаза хлоропластов катализирует не карбоксилирование рибулозо-1,5-дифосфата, а его расщепление на 3-фосфоглицериновую и 2-фосфогликолевую кислоты. Последняя дефосфорилируется с образованием гликолевой кислоты.
Гликолевая кислота из хлоропласта переходит в пероксисому, где окисляется до глиоксиловой кислоты. Глиоксиловая кислота аминируется, превращаясь в глицин. Глицин транспортируется в митохондрию, где из двух молекул глицина синтезируется серин и освобождается СО2.
Серин может поступать в пероксисому и передает аминогруппу на пировиноградную кислоту с образованием аланина, а сам превращается в гидроксипировиноградную кислоту. Последняя при участии НАДФН восстанавливается в глицериновую кислоту. Она переходит в хлоропласты, где включается в цикл Кальвина
У растений С4 -типа выделяющийся при фотодыхании углекислый газ реагирует в клетках мезофилла с фосфоэнолпировиноградной кислотой с образованием щавелевоуксусной и яблочной кислот. Яблочная кислота переходит в клетки обкладки, где служит донором СО2. Растения С3-пути характеризуются высокой интенсивностью фотодыхания. Фосфогликолевая кислота через ряд превращений распадается с выделением С02. Таким образом, при фотодыхании часть промежуточных продуктов фотосинтеза теряется за счет выделения С02. Реакции окисления и карбоксилирования конкурируют друг с другом, а осуществление карбоксилазной или оксигеназной функции зависит от содержания 02 и С02
Фотодыхание снижает эффективность фотосинтеза, приводит к потерям ассимилированного углерода, однако имеет некоторое синтетическое значение. На ранних этапах развития жизни, когда в атмосфере было мало кислорода, рубиско заняло ключевую позицию в фотосинтезе, и ее оксигеназная функция не доставляла проблем. По мере увеличения содержания кислорода потери на фотодыхание нарастали, и у ряда растений возникли механизмы активной доставки к месту работы рубиско углекислого газа (см. C4 и CAM-фотосинтез), увеличивающее долю её карбоксилазной активности до 100%.
Исследования показали, что в растениях в которых процесс фотосинтеза протекает по с4 пути имеются два типа клеток и хлоропластов:
1) мелкие гранальные пластиды в клетках мезофилла листа
2) крупные пластиды, часто лишенные гран, в клетках обкладки, окружающих сосудистые пучки.
Клетки обкладки имеют утолщенные клеточные стенки, содержат большое количество хлоропластов и митохондрий, расположены вокруг сосудистых пучков в 1 или 2 слоя. Совокупность указанных особенностей анатомического строения получила название корончатой анатомии или корончатого синдрома (от слова kranz - корона). Хлоропласты разных типов клеток характеризуются не только особенностями строения, но и разным типам фосфорилирования. В клетках мезофилла по преимуществу происходит нециклическое фосфорилирование и образуется НАДФН, необходимый для цикла Кальвина, идущего в клетках обкладки. В хлоропластах клеток обкладки идет только циклическое фосфорилирование. Такое разделение типов фосфорилирования, возможно, связано с тем, что к хлоропластам клеток обкладки, расположенным в глубине листа, проникает по преимуществу более длинноволновый свет, который не поглощается фотосистемой, ответственной за разложение Н 2 0. На первом этапе С 4 -пути углекислый газ, диффундирующий в лист через устьица, попадает в цитоплазму клеток мезофилла с мелкими хлоропластами, в которых и происходит реакция карбоксилирования фосфоенолпировиноградной кислоты (феп)
Реакция катализируется ферментом фосфоенолпируваткарбоксилазой (фепкарбоксилазой) с образованием щавелевоуксусной кислоты (оксалоацетат). ЩУК преобразуется в яблочную кислоту (малат) или аспарагиновую (аспартат). Восстановление до маната происходит в присутствии НАДФН, а для образования аспартата необходимо наличие NH 4+ . Затем яблочная (или аспарагиновая) кислота, по-видимому, по плазмодесмам передвигается в клетки обкладки. В клетках обкладки яблочная кислота декарбоксилируется ферментом малатдегидрогеназой до пировиноградной кислоты (пируват) и С0 2 . Реакция декарбоксилирования может варьировать у разных групп растений с использованием разных ферментов. С0 2 поступает в хлоропласты клеток обкладки и включается в цикл Кальвина-присоединяется к РБФ. Пируват возвращается в клетки мезофилла и превращается в первичный акцептор С0 2 - ФЕП. Таким образом, при С 4 -пути реакция карбоксилирования происходит дважды. Это позволяет растению создавать запасы углерода в клетках. Акцепторы С0 2 (ФЕП и РБФ) регенерируют, что и создает возможность непрерывного функционирования циклов. Фиксация С0 2 с участием ФЕП и образованием малата или аспартата служит своеобразным насосом для поставки С0 2 в хлоропласты обкладки, функционирующих по С 3 -пути. Поскольку при таком механизме фотосинтеза принимают участие два типа клеток и два типа хлоропластов, этот путь называют еще кооперативным (Ю.С. Карпилов, 1970). Высказывается мнение, что С 4 -путь возник в процессе эволюции как приспособление к изменившимся условиям среды. При возникновении фотосинтеза атмосфера была значительно богаче С0 2 и беднее 0 2 . Именно поэтому важнейший фермент цикла Кальвина Rubisco (РБФ-карбоксилаза/оксигеназа) может работать только при сравнительно высоких концентрациях С0 2 . Благодаря деятельности самих растений состав атмосферы изменился: содержание С0 2 резко уменьшилось, а 0 2 возросло. В изменившихся условиях в осуществлении темновых реакций фотосинтеза появился ряд приспособительных черт. В частности значительно увеличилось содержание фермента Rubisco, который составляет почти половину белков стромы хлоропластов. Вместе с тем у некоторых растений выработался особый, дополнительный путь связывания С0 2 с помощью ФЕП-карбоксилазы. Этот фермент обладает большим сродством к углекислоте и работает при концентрациях С0 2 во много раз более низких по сравнению с Rubisco. Установлено, что и сопротивление мезофилла диффузии С0 2 у С 4 -растений более чем в 3,5 раз меньше и составляет 0,3-0,8 см/с, во время как у С 3 - растений - 2,8 см/с.
Фиксация по С 4 -пути имеет еще ряд преимуществ. Растения С 3 -пути характеризуются высокой интенсивностью процесса, получившего название фотодыхания. Под фотодыханием понимают поглощение кислорода и выделение С0 2 на свету с использованием в качестве субстрата промежуточных продуктов цикла Кальвина. Как показали исследования, Rubisco (РБФ-карбоксилаза/оксигеназа) имеет двойственную функцию и может катализировать не только реакцию карбоксилирования цикла Кальвина: РБФ + С0 2 -> 2ФГК. Rubisco способна реагировать с 0 2 , осуществляя оксигеназную реакцию, при этом образуется фосфогликолевая кислот:
РБФ + 0 2 -> ФГК + фосфогликолевая кислота.
Фосфогликолевая кислота через ряд превращений распадается с выделением С0 2 . Таким образом, при фотодыхании часть промежуточных продуктов фотосинтеза теряется за счет выделения С0 2 . Реакции окисления и карбоксилирования конкурируют друг с другом, а осуществление Rubisco карбоксилазной или оксигеназной функции зависит от содержания 0 2 и С0 2 . Фотодыхание требует повышенной концентрации 0 2 . Между тем, как уже упоминалось, в хлоропластах клеток обкладки концентрация 0 2 понижена, так как в них происходит только циклическое фосфорилирование, при котором вода не разлагается и 0 2 не выделяется. Вместе с тем в клетках обкладки повышена концентрация С0 2 . Такие условия ингибируют процесс фотодыхания в клетках обкладки и поэтому растения С 4 -типа характеризуются очень низкой потерей С0 2 в результате фотодыхания.
Потери на фотодыхание у С 3 -растений особенно возрастают при повышении температуры и освещенности. В этой связи понятно, что растения С 4 - это, главным образом, южные и даже тропические, которые получают дополнительные преимущества в смысле продуктивности фотосинтеза. Оптимум температуры для фотосинтеза у С 3 -растений 20-25°С, тогда как у растений С 4 30-45°С. Светонасыщение фотосинтеза С 4 -растений также происходит при более высоких значениях интенсивности света, чем у С 3 -растений. Так, у растений С 3 -пути интенсивность фотосинтеза перестает увеличиваться при 50% от полного солнечного освещения, в то время как у С 4 -форм этого не происходит. Такие особенности С 4 -растений объясняют высокую интенсивность фотосинтеза при повышенных температуре и освещенности. Характерным признаком растений С 4 -пути является, наконец, то, что образование продуктов цикла Кальвина происходит в хлоропластах, расположенных непосредственно около проводящих пучков. Это благоприятствует оттоку ассимилятов и, как следствие, повышает интенсивность фотосинтеза. Различия между С 3 - и С 4 -растениями можно продемонстрировать, поместив их рядом в одной камере (например, кукурузу и бобы) при высокой температуре и освещенности. Окажется, что С0 2 , выделяясь в процессе дыхания, постепенно переходит к кукурузе и соответственно изменяет темпы ее роста. Кукуруза как бы «съедает» растения бобов
Показано, что С 3 -растения ассимилируют С0 2 на полном солнечном свету со скоростью 1-50 мг/дм 2 ч, а С 4 -растения - со скоростью 40-80 мг/дм 2 ч. Кукуруза, сорго, просо, сахарный тростник являются одними из наиболее продуктивных культур. Так, интенсивность фотосинтеза у кукурузы 85 мг С0 2 /дм 2 ч, сорго - 55 мг С0 2 /дм 2 ч, тогда как у пшеницы всего 31 мг С0 2 /дм 2 ч. Высокая потенциальная продуктивность С 4 -растений наиболее полно реализуется при полном солнечном освещении и высокой температуре. Важной физиологической особенностью С 4 -растений является их высокая засухо- и термоустойчивость. По мнению ряда исследователей возникновению С 4 -пути фотосинтеза способствовали засушливые условия окружающей среды. Уже отмечалось, что пространственное разделение процессов позволяет растениям с С 4 -путем фотосинтеза осуществлять фиксацию углекислоты даже при относительно закрытых устьицах, поскольку хлоропласты клеток обкладки используют С0 2 , накопленный в виде доноров С0 2 (малат или аспартат). Известно, что закрывание устьиц на наиболее жаркое время дня сокращает потери воды за счет транспирации. Вместе с тем С 4 -растения отличаются более экономным расходованием воды. Если С 3 -растения расходуют на образование 1 г сухого вещества 700-1000 г воды, то С 4 -растения - 300-400 г. Главной причиной пониженного расхода воды С 4 -растениями является то, что их устьица оказывают высокое сопротивление диффузии газов. При подвядании листьев и закрытии устьиц это сопротивление многократно возрастает для паров воды и в меньшей степени для С0 2 . Низкая величина сопротивления диффузии клеток мезофилла для С0 2 у С 4 -растений при более высоком сопротивлении устьиц для Н 2 0 благоприятствует повышению интенсивности фотосинтеза при пониженной транспирации. Понятно поэтому, что С 4 -растения имеют преимущество перед С 3 -растениями в засушливых местах обитания благодаря высокой интенсивности фотосинтеза даже при закрытых устьицах. Кроме того, им практически не угрожает опасность перегрева листьев, что связано с высокой термоустойчивостью. Показана солеустойчивость некоторых видов С 4 -растений, например, амаранта, и возможность их применения для фитомелиоративных целей.
С4-растения (С4 plants) - растения, у которых третий этап фотосинтеза протекает с присоединением углекислого газа не к рибулозодифосфату (как у С3-растений), а к трехуглеродному соединению - фосфоенолпировиноградной кислоте, что приводит к образованию четырехуглеродного (С4) соединения - щавелево-уксусной кислоты. К этому типу относятся такие растения, как кукуруза и некоторые другие злаки, преимущественно тропических и субтропических растений (сахарный тростник, сорго)
С3-растения (C3 plants) [англ. c(arbon) - углерод, от лат. carbo - уголь] - растения, у которых третий этап фотосинтеза протекает с участием цикла Кальвина (восстановительный пентозофосфатный цикл, при котором первым продуктом является трехуглеродное (С3) соединение - фосфоглицериновая кислота). К этому типу относится большинство растений.
Физиолого-биохимичсекие различия между С3- и С4-растениями.
У большинства растений первым продуктом фотосинтеза является фосфоглицериновая кислота, содержащая 3 атома водорода. Такие растения называются С3-растениями. Однако уже давно было обнаружено, что у некоторых растений первым продуктом фотосинтеза являются органические кислоты не с тремя, а с четырьмя атомами углерода – щавелевоуксусная и яблочная (малат). Такие растения называются С4-растениями, к ним относятся многие тропические и субтропические растения, в т.ч. некоторые важные культурные виды – сахарный тростник, просо, сорго и кукуруза.
С4-растения имеют характерную особенность в строении листа: у них проводящие пучки окружены 2 кольцами клеток – внешним и внутренним. Внешнее кольцо состоит из обычных клеток мезофилла, а внутреннее – из 222b14hc специализированных клеток, которые называются клетками обкладки проводящего пучка. Клетки обкладки похожи на клетки мезофилла, но отличаются от них строением хлоропластов: в их хлоропластах очень слабо развита система внутренних мембран и содержится очень мало хлорофилла, поэтому хлоропласты клеток обкладки бледно-зеленые. Такое строение листа у С4-растений называется кранц-анатомией («кранц» в переводе означает корона или ореол).
Биохимические различия между С4- и С3-растениями.
Внешние различия между С3- и С4-растениями обусловлены тем, что у них фотосинтез идет по-разному. У С3-растений в одном и том же хлоропласте фиксируется СО 2 , образуется водород и АТФ, а затем в ходе темновой фазы эти вещества используются для синтеза органических веществ. У С4-растений эти процессы разделены в пространстве: АТФ, водород и СО 2 накапливаются в хлоропластах клеток мезофилла, а оттуда транспортируются в хлоропласты клеток проводящего пучка, где из них синтезируются органические вещества. Такой транспорт называется путем Хетча-Слека. У С4-растений между световой и темновой фазами происходит еще 3 стадии фотосинтеза.
13.Методы учета фотосинтеза: качественные и количественные.
Опишем в самых кратких чертах методы определения фотосинтеза. Эти методы могут быть разбиты на две категории:
1.методы, связанные с учетом органических продуктов фотосинтеза;
2.газометрические методы, учитывающие выделение кислорода или поглощение углекислоты.
Как первые, так и вторые могут быть качественного, сравнительного и количественного характера. Из качественных методов мы уже знаем крахмальную пробу. Ее можно произвести не только микроскопически, но и макроскопически. Для этого берут обескрахмаленный лист и выставляют его на свет, закрывши часть листа темной бумагой или станиолью. В тех местах, которые не были закрыты бумагой, образуется крахмал. Последнее легко доказать, обесцвечивая лист спиртом и действуя на него раствором йода в йодистом калии.
Работа по методу половинок возможна только с крупными и симметричными листьями. От листа вдоль по средней жилке срезается половинка. Из нее шаблоном вырезается определенная площадь и высушивается до сухого веса при 105 °C. Вторая половинка листа оставляется на растении на свету в течение нескольких часов. После этого с нею поступают так же, как и с первой. Кроме того, в опыте должен быть и второй лист, у которого оставляется на несколько часов закрытая темной бумагой половинка для учета оттока углеводов из листа и его дыхания. Привес взятой половинки первого листа с прибавленной к нему убылью второй и даст нам величину фотосинтеза. Ее обычно вычисляют на 1 дм2 площади листа за один час.
Из методов, основанных на изучении другой стороны фотосинтеза, а именно учитывающих газообмен, следует отметить качественный метод учета выделившегося кислорода. Водное растение, например элодея, выставляется на свет, и выделяющийся кислород собирается в наполненную водой пробирку (рис. 102). Когда кислорода собирается достаточное количество, вынимают пробирку и вносят в нее тлеющую лучинку. Лучинка вспыхивает.
Сравнительный метод счета пузырьков также проводится с водным растением элодеей. Для этого устанавливают ветку элодеи в пробирке таким образом, чтобы ее конус нарастания был обращен вниз, а срез стебля вверх. Из среза стебля выделяются пузырьки кислорода, число которых и подсчитывается за одну минуту. Используя этот метод, можно выяснить относительную интенсивность процесса фотосинтеза в зависимости от температуры и качества света.
Количественные газометрические методы по учету фотосинтеза многообразны. Остановимся лишь на одном, который дает возможность изучать процесс в естественной обстановке (рис. 103). Не отрывая от растения лист, его заключают в стеклянную камеру, сквозь которую просасывается воздух при помощи аспиратора. Воздух с оставшейся после фотосинтеза углекислотой проходит через специальную трубку с налитым в нее раствором барита (едкий барий), поглощающим оставшуюся углекислоту воздуха. Перед входом в трубку небольшой продырявленной пластинкой воздух разбивается на мелкие пузырьки, которые, проходя через раствор барита, отдают раствору находящуюся в них углекислоту. После окончания опыта раствор барита титруют кислотой. Чем больше поглотилось углекислого газа зеленым листом, тем больше кислоты пойдет на титрование, так как при этом будет образовываться меньшее количество углекислого бария. Параллельно ставится вторая трубка, через которую пропускается воздух, чтобы определить в нем содержание углекислоты и выяснить количество углекислоты, поглощенной зеленым листом. Метод этот хорош тем, что дает возможность определить фотосинтез в природной обстановке при нормальном содержании углекислоты в воздухе. Недостатком его являются искусственные условия в камере, приводящие нередко к перегреву листа. При перегреве нормальный ход фотосинтеза изменяется, так как интенсивность процесса при этом сильно падает.
В 1965 г. было обнаружено, что первыми продуктами фотосинтеза у сахарного тростника (растение тропиков) являются органические кислоты, в состав которых входят 4 атома углерода (яблочная, щевелевоуксусная и аспарагиновая), а не 3С-кислота (фосфоглицериновая), как у большинства растений умеренного климата. С тех пор выявили множество растений, в основном тропических и субтропических, и имеющих порой важное экономическое значение, у которых фотосинтез протекает по такому же пути. Они получили название С4-растений. Примерами могут служить кукуруза, сорго, сахарный тростник и просо. Растения, в которых первым продуктом фотосинтеза является трехуглеродная фосфоглицериновая кислота, носят название С3-растения.
Биохимию именно С3-растений мы рассматривали до сих пор в этой главе.
В 1966 г. австралийские исследователи Хэтч и Слэк (Hatch, Slack) показали, что С4-растения значительно эффективнее, чем Сграстения, поглощают диоксид углерода: они способны удалять СО: из экспериментальной атмосферы вплоть до концентрации 0,1 части на миллион, тогда как для С 3 -растений это значение составляет 50-100 Ч*млн -1 . Хэтч и Слэк описали новый путь метаболизма углерода у Сграсгений, получивший название путь Хэтча-Слэка . Далее мы изучим этот процесс на примере типичного Сграстения - кукурузы.
У С4-растений листья имеют характерную особенность строения: вокруг каждого проводящего пучка у них расположены два ряда клеток. У клеток внутреннего кольца - обкладки проводящего пучка - хлоропласты по своей форме отличаются от хлоропластов клеток мезофилла внешнего кольца. Различие в строении хлоро-пластов у С 4 -растений получило название диморфизма (наличие двух форм). На рисeyrt, Ли Б показана так называемая «кранц-анатомия» (Kranz - корона, ореол; таким образом описываются те два ряда клеток, которые окружают проводящие пучки и имеют в сечении вид двух колец). Биохимические превращения, протекающие в этих клетках, описаны ниже; см. также рис. 7.22.
Путь Хэтча-Слэка
Путь Хэтча-Слэка предназначен для транспортировки диоксида углерода и водорода из клеток мезофилла в клетки обкладки проводящих пучков. Из клеток обкладки проводящих пучков диоксид углерода высвобождается и поступает в обычный С 3 -путь фотосинтетических превращений.
Захват (фиксация) диоксида углерода в клетках мезофилла
Диоксид углерода фиксируется в цитоплазме клеток мезофилла. Механизм этого процесса приведен в следующем уравнении:
Акцептором диоксида углерода служит фосфоенолпируват (ФЕП) вместо РиБФ у С3-растений, а вместо фермента РиБФ-карбоксилазы у С4-растений участвует фермент ФЕП-карбоксилаза. Фермент ФЕП-карбоксилаза работает значительно более эффективно, чем фермент С 3 -растений по двум причинам. Во-первых, ФЕП-карбоксилаза обладает большим сродством к диоксиду углерода, а во-вторых, ее работа не подвергается конкурентному ингибированию кислородом. Образовавшаяся щавелево-уксусная кислота далее превращается в малат, 4С-кислоту.
Малатный обходной путь (шунт)
Пройдя через плазмодесмы в клеточных стенках, малат попадает в хлоропласты клеток обкладки проводящего пучка, где он, соединяясь с диоксидом углерода, превращается в пируват (ЗС-кислоту). При этом выделяется водород, который используется для восстановления НАДФ. Обратите внимание, что в клетки мезофилла диоксид углерода и водород поступают извне, а затем в клетках обкладки проводящего пучка они вновь удаляются. Суммарным эффектом этих процессов является перемещение диоксида углерода и водорода из клеток мезофилла в клетки обкладки проводящего пучка.
Регенерация акцептора диоксида углерода
Пируват возвращается в клетки мезофилла , где в результате присоединения фосфатной группы от АТФ используется для регенерации ФЕП. На это расходуется энергия двух высокоэнергетических фосфатных связей.
- Вернуться в оглавление раздела " "
